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              小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說明
              點擊次數(shù):1055 更新時間:2019-07-25

              小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說明

               

               

               

               

                 撫生開展的活動得到的反饋還不少,本公司試劑在科研界得到了長足發(fā)展,除了在其質(zhì)量和價格上取勝,同時還堅守完善的售前售后服務,而這些正是我司的經(jīng)營理念和成功經(jīng)驗。在此我們真誠的希望能夠與更多的科研單位獲得長期的友情合作!接下來介紹

              小鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說明

              操作方法:

               

              1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

              2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞3次,調(diào)整細胞濃度達到104

              -106/ml 左右,通過反復凍融,使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份,或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。

              3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。

              4. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上

              清。

              5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。

              6. 組織標本:切取組織標本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標本勻漿,以2000-3000

              rmp離心20 分鐘,收集上清進行檢測。

              7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

              8. 保存:如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-70 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

               

              1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

              2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

              3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

              4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

              5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

              6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

              7.溫育:操作同3。

              8.洗滌:操作同5。

              9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。

              10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

              11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

               

               

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