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              RT-PCR試劑盒的使用方法及使用注意事項介紹
              點擊次數(shù):682 更新時間:2020-07-09
                RT-PCR試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被樣本抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的樣本呈正相關(guān)。
                RT-PCR試劑盒的使用首先應(yīng)平衡至室溫(20-25°C )再試驗( 取出所需反應(yīng)板)
                1. 加入50ul標準品、血清標本于相應(yīng)反應(yīng)板孔中。
                2. 每孔加入100ul酶聯(lián)物,輕輕混勻30秒(重要),室溫60分鐘。
                3. 洗板:甩盡板內(nèi)液體,用蒸餾水或者洗滌液(普通洗滌液,自配)洗滌反應(yīng)板,并去除
                水滴(在厚疊吸水紙上拍干);這樣反復洗滌5次。
                4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫20分鐘。
                5. 每孔加入50ul終止液。輕輕混勻30秒;30分鐘內(nèi)在450nm處讀OD值。
                以O(shè)D值為縱坐標,以標準品濃度為橫坐標,繪制標準曲線。根據(jù)血清樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
                下面要為您介紹的是RT-PCR試劑盒的注意事項:
                1、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時。
                2、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
                3、凍結(jié)標本溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛混合,不要在混勻器上強烈震蕩。
                4、酶標包被板開封后如未用完,應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
                5、渾濁或有沉淀的標本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。
                6、標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。保存過久可發(fā)生聚合在ELISA中可使本底加深。
                7、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
                8、反復凍融會使蛋白效價降低,所以代測樣本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。
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