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              產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

              T4 GP41 Helicase

              簡要描述:

              T4 GP41 Helicase公司正在出售的產(chǎn)品:人白血病細(xì)胞 絲氨/蘇氨蛋白磷3B封閉多肽 大腸桿菌通用PCR檢測試劑盒含致病性和非致病性 大鼠維生C(VC)ELISA試劑盒 土壤堿性木聚糖活性比色法檢測試劑盒/土壤堿性半纖維活性比色法檢測試劑盒 百脈根中慢生根瘤菌 原鈣粘蛋白γB4抗體

              更新時間:2024-01-14

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              T4 GP41 Helicase

              公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

              貨號

              產(chǎn)品名稱

              規(guī)格

              A-PJ1138

              T4 GP41 Helicase

              50 ug

              T4 gp41 DNA Helicase 是來源于 T4 噬菌體基因組編碼的三大解旋酶之一,它為復(fù)制型解旋酶,即解旋后可在 DNA 聚合酶(T4 gp43)的作用下引導(dǎo) DNA 前導(dǎo)鏈的延伸。Gp41 解旋酶屬于 SF4 解旋酶家族,偏好 5’-3’方向解旋;除解旋外, gp41 還可與 gp61 primase 形成引發(fā)復(fù)合體引導(dǎo)滯后鏈的合成。因此,gp41 蛋白為 DNA先導(dǎo)鏈和滯后鏈合成所必需,且這種 gp41 的這種特性在其 loader gp59 蛋白存在的情況下顯著增強(qiáng)。Gp41 是一種高進(jìn)行型解旋酶,在 ssDNA 上的傳送速率為~500nt/s,解旋 dsDNA 的速率為~250bp/s。本制品為經(jīng)克隆后重組表達(dá)而得重組蛋白。

              儲存:-20℃
              Storage Buffer:
              20mM Tris-HCl,pH7.5
              200mM NaCl
              5mM DTT
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              PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

              試劑:
              模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
              設(shè)備:
              PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

              PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

              PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

              一、變性:

              利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

              二、退火或稱接合,復(fù)性:

              在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。

              三、延伸:

              DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

              PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

              1、變性溫度和時間:

              保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

              2、復(fù)性溫度和時間:

              PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

              3、延伸溫度和時間:

              一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

              4、循環(huán)數(shù):

              其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

              公司正在出售的產(chǎn)品:

              耐金葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              α黑色細(xì)胞刺激ELISA試劑盒 α-MSH免費(fèi)代測試劑

              人腺病毒D80型探針法熒光定量PCR試劑盒

              鮰愛德華氏菌PCR檢測試劑盒直銷

              登革熱抗體IgMELISA試劑盒 DF-Ab IgM免費(fèi)代測試劑

              超級細(xì)菌PCR檢測試劑盒說明書

              狐貍源性成分(Vulpes)核檢測試劑盒

              高分子量細(xì)胞角蛋白ELISA試劑盒

              麻風(fēng)分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              馬鈴薯Cry3c基因PCR檢測試劑盒

              電子轉(zhuǎn)移黃蛋白αELISA試劑盒

              麻疹/風(fēng)疹雙重染料法熒光定量PCR試劑盒

              美人魚發(fā)光桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移11ELISA試劑盒

              流行性造血器官壞死病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              歐洲放線菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              耳蝸蛋白ELISA試劑盒

              麻風(fēng)桿菌(ML)核檢測試劑盒

              諾氏梭狀桿菌PCR檢測試劑盒

              反式高爾基體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)蛋白2ELISA試劑盒

              禽腦脊髓炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              梅克爾多元癌細(xì)胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              芳基硫酯EELISA試劑盒

              潰蝕齒密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒

              梅迪RT-維斯納病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              防御β133ELISA試劑盒

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              膿腫分枝桿菌

              封閉蛋白11ELISA試劑盒

              螺旋體通用探針法熒光定量PCR試劑盒

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              病毒H5N1亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

              內(nèi)阿米巴通用PCR檢測試劑盒說明書

              人維生E(VE)ELISA檢測試劑盒

              嗜血桿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

              流行性出血熱病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              T4 GP41 Helicase人白介2(IL-2)抗體試劑盒ELISA

              鴨沙門氏菌PCR檢測試劑盒

              山羊支原體山羊肺炎亞種探針法熒光定量PCR試劑盒

              人阿立新A(Orexin A)試劑盒ELISA

              馬皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒

              植物內(nèi)源基因tRNA-Leu核檢測試劑盒

              人單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA檢測試劑盒

              禽腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒

               


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