• <source id="m73mq"></source>

    1. <small id="m73mq"><tbody id="m73mq"><noframes id="m73mq"></noframes></tbody></small>
      1. 
        
        <form id="m73mq"><tr id="m73mq"></tr></form>
        <source id="m73mq"></source>

        <small id="m73mq"><tbody id="m73mq"><noframes id="m73mq"></noframes></tbody></small>

            <i id="m73mq"><ins id="m73mq"></ins></i>

            1. <source id="m73mq"><ins id="m73mq"></ins></source>
            2. <td id="m73mq"><ins id="m73mq"><label id="m73mq"></label></ins></td>
            3. 男人添女人下面视频_久久精品欧美日韩_欧美日韩精品一二三区_亚洲一区二区三区激情_来一水AV@lysav

              產品列表PRODUCTS LIST

              首頁>產品中心>PCR相關試劑>克隆相關>Gibson無縫克隆試劑盒

              Gibson無縫克隆試劑盒

              簡要描述:

              Gibson無縫克隆試劑盒公司正在出售的產品:中華鱉心肌來源細胞 胎盤催乳1/2封閉多肽 豬瘟病毒野生株PCR檢測試劑盒 大鼠生長激(GH)ELISA檢測試劑盒 葡萄糖含量活性比色法檢測試劑盒 棲東海菌 18號染色體開放閱讀框56抗體

              更新時間:2024-01-12

              分享到: 1
              在線留言
              Gibson無縫克隆試劑盒

              商品屬性:

              產品名稱

              規(guī)格

              貨號

              Gibson無縫克隆試劑盒

              10T

              A-PJ1086

              Gibson無縫克隆試劑盒

              50T

              A-PJ1086

              Gibson 無縫連接試劑盒是一種混合酶系統(tǒng),其可將任意方法線性化的載體和與其兩端具有重疊區(qū)域的一個或多個 PCR 片段定向重組連接。該方法不依賴于 T4 DNA 連接酶,不受載體和目的片段的酶切位點限制,可在 30 分鐘內實現(xiàn) PCR 片段高效定向無縫克隆至載體的任意位置,從而獲得完整的雙鏈 DNA 分子。該試劑盒使用簡單,只需加入合適比例的載體和 PCR 片段在室溫孵育 15-30min 即可完成片段的連接。
              原理
              T5 外切酶可從雙鏈 DNA5'端切割形成 3'突出末端, 從而促進重疊區(qū)域的具有互補序列的片段進行退火。高保真 DNA 聚合酶可使退火的片段向 3'端延伸,從而填補片段缺口。Taq DNA 連接酶可封閉缺刻從而獲得完整的雙鏈 DNA 分子。

              QQ截圖20240110094643.jpg優(yōu)勢
              1. 室溫孵育即可完成片段的連接,無需 50℃。
              2. 不受載體或插入片段酶切位點限制在任意位置進行無縫克隆
              3. 不依賴于 T4 連接酶,高效連接,無堿基缺失
              4. 可同時高效連接一個或多個 PCR 片段
              5. 無需額外的亞克隆,菌檢陽性率高達 95%
              組分

              保存 
              -20℃可保存 2 年,-80℃可保存 5 年,避免反復凍融。



              65.jpg

              67.jpg


              PCR基本步驟及注意事項?

              一、實驗原理

              PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現(xiàn)對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環(huán)境;反應過程同生物體內一樣,DNA雙鏈打開,引物結合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

              在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結束反應, 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

              二、主要的成分

              1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。

              注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結合,從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現(xiàn)PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

              2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

              PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

              沒有ct值

              檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:

              1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

              2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

              3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

              4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

              5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

              ct值過晚

              在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

              因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設計和目的進行。

              1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

              2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

              3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

              4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;

              5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。

              公司正在出售的產品:

              諾如病毒G5型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              白介轉換ELISA試劑盒 ICE免費代測試劑

              鴨黃病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              節(jié)瘤擬桿菌PCR檢測試劑盒說明書

              蛋白C抑制因子ELISA試劑盒 PCI免費代測試劑

              貓支原體PCR檢測試劑盒價格

              C型產氣莢膜桿菌(CP-C)核檢測試劑盒

              Cylindromatosis蛋白ELISA試劑盒

              馬流感病毒亞型PCR檢測試劑盒

              間日瘧PCR檢測試劑盒

              蛋白激RELISA試劑盒

              馬流感病毒H3N8亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              曼氏桿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒染料法熒光定量PCR試劑盒

              凋亡抑制因子3ELISA試劑盒

              鴨瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              普通變形桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              短蛋白聚糖ELISA試劑盒

              異嗜性小鼠白血病病毒(X-MuLV)核檢測

              氣單胞菌通用PCR檢測試劑盒

              多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移8ELISA試劑盒

              禽白血病病毒G亞群染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              馬隱秘桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              二羥基激2ELISA試劑盒

              鯉皰疹病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒

              馬腺疫鏈球菌PCR檢測試劑盒

              DELISA試劑盒

              諾卡菌通用PCR檢測試劑盒供應

              葡萄孢菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              紡錘體蛋白2ELISA試劑盒

              馬立克氏病病毒1型探針法熒光定量PCR試劑盒

              淋病奈瑟球菌核檢測試劑盒

              人的牛血清白蛋白(BSA)ELISA檢測試劑盒

              禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒價格

              牛捻轉胃蟲PCR檢測試劑盒價格

              β內酰胺抑制劑(BLI)試劑盒elisa

              小鵝瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              腸出血性大腸桿菌O157血清型染料法熒光定量PCR試劑盒

              (ACR)ELISA試劑盒

              蛙病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              禽結核分枝桿菌PCR檢測試劑盒

              β-防御2 ELISA檢測試劑盒

              Gibson無縫克隆試劑盒溶組織內阿米巴探針法熒光定量PCR試劑盒

              肉毒桿菌E型(CB-E)核檢測試劑盒

              人雌激誘導蛋白PS2 ELISA試劑盒

              禽傳染性支氣管炎病毒PCR檢測試劑盒

               


              男人添女人下面视频_久久精品欧美日韩_欧美日韩精品一二三区_亚洲一区二区三区激情_来一水AV@lysav
            4. <source id="m73mq"></source>

              1. <small id="m73mq"><tbody id="m73mq"><noframes id="m73mq"></noframes></tbody></small>
                1. 
                  
                  <form id="m73mq"><tr id="m73mq"></tr></form>
                  <source id="m73mq"></source>

                  <small id="m73mq"><tbody id="m73mq"><noframes id="m73mq"></noframes></tbody></small>

                      <i id="m73mq"><ins id="m73mq"></ins></i>

                      1. <source id="m73mq"><ins id="m73mq"></ins></source>
                      2. <td id="m73mq"><ins id="m73mq"><label id="m73mq"></label></ins></td>
                      3. 梅河口市| 家居| 会东县| 榆中县| 普定县| 宁晋县| 松江区| 鸡泽县| 阿城市| 娱乐| 云安县| 蓬莱市| 聂拉木县| 邓州市| 图木舒克市| 黄石市| 精河县| 灵丘县| 吉首市| 泰宁县| 芜湖县| 桃源县| 云阳县| 张家界市| 内乡县| 乡宁县| 泸水县| 辽宁省| 黄陵县| 如皋市| 邹城市| 河间市| 达拉特旗| 永胜县| 兴宁市| 汝南县| 七台河市| 永年县| 健康| 孝昌县| 萍乡市|