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              產品列表PRODUCTS LIST

              Western信號增強劑

              簡要描述:

              Western信號增強劑公司正在出售的產品:小鼠惡性肉瘤細胞 CAP1封閉多肽 古柏線蟲通用PCR檢測試劑盒 大鼠髓過氧化物(MPO)試劑盒 ELISA 水樣中汞離子(Hg2+)濃度活性比色法檢測試劑盒 奇異假芽孢桿菌 FRG2B蛋白抗體

              更新時間:2024-01-12

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              Western信號增強劑

              公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

              貨號

              產品名稱

              規(guī)格

              A-PJ1106

              Western信號增強劑

              100ml

              描述:在蛋白的轉印過程中,電流對抗原有一定的損傷,從而導致后續(xù)抗體無法識別抗原結構。本 Western 信號增強劑含有的成分,可以修復抗原結構,使抗原處于更利于抗體識別的狀態(tài)。通常使用該溶液修復抗原后,可極大提高檢測的靈敏度(提高 3~10 倍)、提高低豐度蛋白的檢測效率,除此外,可以節(jié)約一抗的使用量。儲存:4°C,可保存 2 年。
              操作方法
              1. 轉膜結束后,將 NC 膜(或 PVDF)轉入適量 Western BlotSignal Enhancer 中,室溫孵育 20min。
              2. 倒掉 Western Blot Signal Enhancer 溶液,直接進行下一步的封閉、一抗孵育、二抗孵育等后續(xù)操作。
              注意:轉膜結束后的膜不易長時間浸泡于 Western BlotSignal Enhancer 中,否則會導致膜破碎。

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              PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

              試劑:
              模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節(jié)反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
              設備:
              PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

              PCR相關基礎實驗:

              PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

              一、變性:

              利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。

              二、退火或稱接合,復性:

              在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

              三、延伸:

              DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

              PCR反應條件優(yōu)化:

              1、變性溫度和時間:

              保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

              2、復性溫度和時間:

              PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設定。

              3、延伸溫度和時間:

              一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據(jù)待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

              4、循環(huán)數(shù):

              其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴增增加。

              公司正在出售的產品:

              牛皰疹病毒1型染料法熒光定量PCR試劑盒

              γ谷氨酰半胱氨合成ELISA試劑盒 γ-ECS免費代測試劑

              鼠肺炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              節(jié)片代凡絳蟲PCR檢測試劑盒說明書

              蛋白激抑制因子αELISA試劑盒 PKIα免費代測試劑

              問號鉤端螺旋體PCR檢測試劑盒直銷

              人類白細胞抗原(HLA-B)核檢測試劑盒

              半胱氨豐富跨膜BMP調節(jié)因子1ELISA試劑盒

              馬科研PCR檢測試劑盒

              空腸彎曲菌PCR檢測試劑盒

              蛋白3特異性抗中性粒細胞胞質抗體ELISA試劑盒

              馬節(jié)桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              貓庖疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              端粒逆轉錄ELISA試劑盒

              嗜皮菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              平尾毛細線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

              多免疫球蛋白受體ELISA試劑盒

              對蝦桃拉病毒(TSV)核檢測試劑盒

              葡萄孢菌PCR檢測試劑盒

              耳椎蛋白90ELISA試劑盒

              禽傳染性支氣管炎病毒JMK型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              貓庖疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              發(fā)動蛋白2ELISA試劑盒

              雷斯頓埃博拉病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              貓傳染性腹膜炎(FIP)PCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

              芳基硫酯GELISA試劑盒

              諾如病毒G5型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              肺炎衣原體抗原ELISA試劑盒

              馬爾太蟲通用PCR檢測試劑盒

              流感病毒N6亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

              人彈性蛋白2,中性粒細胞(ELA2)試劑盒ELISA

              禽傳染性支氣管炎病毒型PCR檢測試劑盒

              牛茨城病病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              人細胞毒(CTX)ELISA試劑盒

              瓜納圖巴病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              腸道病毒D組探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              Western信號增強劑人半乳糖凝集-7(Gal-7)檢測試劑盒elisa

              小孢子酒曲菌PCR檢測試劑盒

              麻風分枝桿菌PCR檢測試劑盒

              β羥丁(β-OHB)ELISA試劑盒

              腸出血性大腸桿菌O157血清型染料法熒光定量PCR試劑盒

              牛源性成分(Bovine)核檢測試劑盒

              人促胰液/分泌受體(SR)ELISA試劑盒

              病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)核檢測試劑盒

               


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