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              產品列表PRODUCTS LIST

              5min RNA純化試劑盒

              簡要描述:

              5min RNA純化試劑盒公司正在出售的產品:草魚胚胎細胞 磷化蛋白激C亞性封閉多肽 衣原體通用PCR檢測試劑盒 大鼠神經生長因子(NGF)ELISA試劑盒 尿(UA)含量活性比色法檢測試劑盒 青海纖細芽胞桿菌 17號染色體開放閱讀框66抗體

              更新時間:2024-01-12

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              5min RNA純化試劑盒

              公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

              貨號

              產品名稱

              規(guī)格

              A-PJ1076

              5min RNA純化試劑盒

              10T

              A-PJ1076

              5min RNA純化試劑盒

              50T   

              描述:RNA 純化試劑盒的優(yōu)點為迅速僅需 5min 即可完成操作,回收率可高達 70~95%。該試劑盒采用 高特異吸附能力的硅膠吸附柱,應用優(yōu)化好的特定緩沖 液,可選擇性地結合回收目標 RNA,并去除雜蛋白、鹽 等。該試劑盒每次可純化得到高達 50 μg 的 RNA 片段 (>15nt),回收的產物可直接用于 RT-PCR、用于 NGS 的 RNA 文庫制備、基因編輯、顯微注射、RNA 標記、轉染 等。

               組分

              自備試劑:75%乙醇。
              儲存:室溫保存,有效期 2 年。
              6.png操作方法
              1. 向 50 µl 待回收樣品中加入 100 µl RNA CleanupBinding Buffer 用槍頭吹打混合均勻。
              注意:若樣品不足 50 µl 需加入 RNase Free H2O 補至 50 µl;若樣品大于 50 µl 則可按比例縮放緩沖液體積,當樣品大于 150 µl 時應上兩根吸附柱。
              2. 向上述溶液中加入預冷 150 µl 無水乙醇(等體積),槍頭吹打混合均勻。(當 15nt<RNA<25nt 時可加入 2倍體積的無水乙醇)。
              3. 將上述溶液共 300 µl 加入到吸附柱中,室溫靜置 30s。4℃ 13,000rpm 離心 30s,棄去過柱液。
              4. 向吸附柱中加入預冷的 700 µl 75%乙醇,4℃13,000rpm 30s,棄去過柱液,重復此步驟一次。
              5. 13,000rpm 空離 2min 后,將吸附柱轉移至新的 1.5ml收集管中,室溫放置 2min 使殘留乙醇揮發(fā)。
              6. 向吸附柱芯中加入 50~100 µl RNase Free H2O,室溫靜置 1min 后,4℃ 13,000rpm 離心 2min,獲得的產物即為純化的 RNA。可立即使用或于-80℃保存。



              5.png

              PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

              試劑:
              模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節(jié)反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
              設備:
              PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

              PCR相關基礎實驗:

              PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

              一、變性:

              利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。

              二、退火或稱接合,復性:

              在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

              三、延伸:

              DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

              PCR反應條件優(yōu)化:

              1、變性溫度和時間:

              保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

              2、復性溫度和時間:

              PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

              3、延伸溫度和時間:

              一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

              4、循環(huán)數:

              其他參數選定后,PCR循環(huán)次數主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數。循環(huán)次數越多,非特異擴增增加。

              公司正在出售的產品:

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              馬生殖泰勒氏菌PCR檢測試劑盒

              法尼基轉移βELISA試劑盒

              瘧原蟲PCR檢測試劑盒直銷

              普通變形桿菌PCR檢測試劑盒

              防御β129ELISA試劑盒

              馬流產沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              兩岐雙岐桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              人第10號染色體缺失并與張力蛋白同源的磷(PTEN/MMAC1)試劑盒ELISA

              茄病鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              牛腎盂腎炎棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

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              山羊痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

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              β半乳糖苷(βGAL) ELISA檢測試劑盒

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              禽白血病病毒PCR檢測試劑盒

               


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