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              產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

              Bst 4.0 Basic Bead

              簡(jiǎn)要描述:

              Bst 4.0 Basic Bead公司正在出售的產(chǎn)品:人胚惡性畸胎瘤細(xì)胞 腫瘤抑制基因p63α封閉多肽 牛腸杯狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激(GC)ELISA試劑盒 過氧化氫(H2O2)活性比色法檢測(cè)試劑盒 遠(yuǎn)青弧菌 蛋白體PSMβ6抗體

              更新時(shí)間:2024-01-12

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              Bst 4.0 Basic Bead

              商品屬性:

              產(chǎn)品名稱

              規(guī)格

              貨號(hào)

              Bst 4.0 Basic Bead

              100Tx25μl

              A-PJ1009

              該制品為全體系凍干微球制品,內(nèi)含恒溫?cái)U(kuò)增所用的反應(yīng)緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,其不包含任何染料,使用時(shí)只需要加入引物、模板即可進(jìn)行核酸恒溫?cái)U(kuò)增。Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉(zhuǎn)錄),還具有依賴于DNA 的聚合酶活性,因此無論 DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增。該制品是進(jìn)行 LAMP 及RT-LAMP 擴(kuò)增反應(yīng)的試劑。
              本制品不包含任何顯色染料,可自行搭配相關(guān)染料或檢測(cè)手段進(jìn)行 LAMP 反應(yīng),包括搭配 OG 染料管進(jìn)行橙綠變色、搭配標(biāo)記 Oligo 進(jìn)行試紙條檢測(cè)、搭配熒光染料進(jìn)行熒光檢測(cè)、搭配 Molecular Beacon 探針進(jìn)行熒光檢測(cè)等方法。
              儲(chǔ)存:-20℃保存 2 年;室溫(25℃)保存>6 個(gè)月。
              使用方法:(進(jìn)行 LAMP 橙綠變色擴(kuò)增):
              1. 關(guān)于 OG 橙綠變色管說明:橙綠變色染料(OG Dye)以烘干的形式預(yù)加在8聯(lián)管蓋上。LAMP反應(yīng)完畢后,將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP的反應(yīng)產(chǎn)物將與 OG 染料形成綠色肉眼可見變色反應(yīng)(陽(yáng)性),而未擴(kuò)增的 EP 管為深橙色(陰性)。本試劑管常溫長(zhǎng)期保存。
              2. 配制變色 LAMP 反應(yīng)體系
              在 OG 染料管(0.2ml EP)反應(yīng)管中加入下述試劑
              Bst4.0 Basic Bead 1 粒
              10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
              模板 DNA/RNA X μl
              ddH2O 到總體積 25 μl
              10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、
              注意:全部試劑加入完畢后,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙
              3. 反應(yīng)體系配好后,置于 65°C 進(jìn)行反應(yīng) 15~30min。(擴(kuò)增良好的引物組合,通常 20min 即可變色,一般不超過30min)。
              4. 觀察結(jié)果:反應(yīng)結(jié)束后,從加熱裝置中將反應(yīng)管取出,室溫 2min,使整個(gè)反應(yīng)管冷卻下來。再次用力將反應(yīng)管
              注意:
              (1)觀察結(jié)果時(shí),盡可能不要與配制反應(yīng)空間共用,以防止污染操作臺(tái)。
              (2)盡管  選取的為高密封
              注意事項(xiàng):
              (1)關(guān)于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應(yīng)體系后,可加入一滴礦物油覆蓋于反應(yīng)液上部,以減少氣溶膠的污
              (2)在使用其它熒光染料時(shí),使用濃度可自行優(yōu)化,通染料可能導(dǎo)致擴(kuò)增失敗。
              (3)本試劑不支持,濁度、pH 變色、HNB 變色反應(yīng),請(qǐng)勿嘗試。
              (4)關(guān)于 LAMP 成品試劑的建議, Bst 4.0 Basic Bead凍干球和 OG 橙綠變色管均為室溫穩(wěn)定狀態(tài),可長(zhǎng)期保存。將擴(kuò)增引物加入到 OG 橙綠變色管底部,于 70°C 烘干,再加入一粒凍干球即可制備成全體系檢測(cè)試劑。QQ截圖20240110094643.jpg


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              PCR基本步驟及注意事項(xiàng)?

              一、實(shí)驗(yàn)原理

              PCR是體外人工選擇性擴(kuò)增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計(jì)的特定序列,實(shí)現(xiàn)對(duì)特定位置的擴(kuò)增;PCR Buffer提供一個(gè)反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應(yīng)溫度實(shí)現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過程即可實(shí)現(xiàn)對(duì)特定片段DNA的大量擴(kuò)增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

              在擴(kuò)增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴(kuò)增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺(tái)效應(yīng)。平臺(tái)期(Plateau)會(huì)使原先由于錯(cuò)配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴(kuò)增,達(dá)到較高水平。因此,應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺(tái)期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達(dá)平臺(tái)期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

              二、主要的成分

              1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對(duì)于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時(shí)間以及模板的量。一般對(duì)于大的基因組DNA預(yù)變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

              注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原因就在于實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識(shí)別DNA鏈。

              2.對(duì)于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對(duì)于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對(duì)PCR造成影響,故需對(duì)提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會(huì)引起非特異性擴(kuò)增。對(duì)于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

              PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題有哪些?

              沒有ct值

              檢測(cè)結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

              1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準(zhǔn));

              2、PCR程序設(shè)置錯(cuò)誤,檢測(cè)熒光信號(hào)的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸時(shí)采集信號(hào),另外熒光采集是否選中;

              3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測(cè)引物和探針是否降解;

              4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對(duì)未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準(zhǔn)備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲(chǔ)備,避免反復(fù)凍融;

              5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴(kuò)增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會(huì)影響擴(kuò)增)。

              ct值過晚

              在相對(duì)定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對(duì)定量中, 對(duì)低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會(huì)增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準(zhǔn)確。

              因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和目的進(jìn)行。

              1、擴(kuò)增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計(jì)不合理, 需要重新設(shè)計(jì);

              2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當(dāng)降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長(zhǎng)10s);

              3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

              4、PCR產(chǎn)物太長(zhǎng)。PCR產(chǎn)物設(shè)計(jì)超過500bp;

              5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測(cè)或?qū)⒛0暹M(jìn)行稀釋。

              公司正在出售的產(chǎn)品:

              高致病性豬生殖與呼吸綜合癥病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              補(bǔ)體因子IELISA試劑盒 CFI免費(fèi)代測(cè)試劑

              福賽斯坦納菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              肺炎衣原體PCR檢測(cè)試劑盒直銷

              串珠ELISA試劑盒 HSPG2免費(fèi)代測(cè)試劑

              甲型流感病毒77亞型PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格

              雞滑液囊支原體(MS)核檢測(cè)試劑盒

              C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員EELISA試劑盒

              貓血支原體PCR檢測(cè)試劑盒

              登革熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒

              促胰液/分泌受體ELISA試劑盒

              貓血支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

              馬杜拉分枝菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              蛋白激CιELISA試劑盒

              粗球孢子菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              禽傳染性支氣管炎病毒疫苗株染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              蛋白水解誘導(dǎo)因子/皮離蛋白ELISA試劑盒

              偽狂犬病毒通用型(PRV-gB)核檢測(cè)試劑盒

              病毒H7/新城疫病毒(AIV-H7/NDV)核檢測(cè)試劑盒 (雙重?zé)晒?/span>PCR)

              凋亡蛋白活化因子1ELISA試劑盒

              皮炎芽生菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              馬媾疫錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

              端粒重復(fù)結(jié)合因子2ELISA試劑盒

              流感嗜血桿菌核檢測(cè)試劑盒

              馬傳染性貧血(EIAVPCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

              多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移2ELISA試劑盒

              牛白血病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              禽副粘病毒2PCR檢測(cè)試劑盒說明書

              反式高爾基體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)蛋白2ELISA試劑盒

              貓皰疹病毒(FHV)PCR檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)

              藍(lán)氏賈第鞭毛蟲PCR檢測(cè)試劑盒說明書

              人副腫瘤性天皰瘡(PNP)抗體試劑盒ELISA

              諾沃克病毒PCR檢測(cè)試劑盒

              諾氏梭狀桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              人髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88(MYD88)elisa試劑盒

              木賊鐮刀菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              犬艾利希體(犬埃立克體)探針法熒光定量PCR試劑盒

              人膽紅氧化代謝物 ELISA檢測(cè)試劑盒

              普雷沃菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              悉尼馬爾太蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

              v-rel禽網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞過多癥病毒癌基因同源物B(RelB)ELISA檢測(cè)試劑盒

              Bst 4.0 Basic Bead反芻獸考德里氏體探針法熒光定量PCR試劑盒

              豬多殺性巴氏桿菌(SPA)核檢測(cè)試劑盒

              人補(bǔ)體蛋白5(C5)ELISA試劑盒

              蜱傳出血熱病毒PCR檢測(cè)試劑盒

               


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