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              產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

              2XT4 DNA Ligase

              簡要描述:

              2XT4 DNA Ligase公司正在出售的產(chǎn)品:低轉(zhuǎn)移肺癌細胞 DNA斷裂因子相似蛋白A封閉多肽 百日咳波氏桿菌PCR檢測試劑盒 大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)試劑盒 ELISA 谷胱過氧化物(GPX)活性比色法檢測試劑盒(GR法) 海水硝鹽還原菌 環(huán)指蛋白166抗體

              更新時間:2024-01-12

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              2XT4 DNA Ligase

              公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

              貨號

              產(chǎn)品名稱

              規(guī)格

              A-Hc2233

              2XT4 DNA Ligase

              20

              產(chǎn)品概述:
              DNA連接是一種常用的分子生物學(xué)實驗方法。T4 DNA 連接酶是使用最多的連接酶。2×T4 DNA Ligase Master Mix是一種高效的T4 DNA連接酶預(yù)混型試劑,包含了T4 DNA 連接酶、連接緩沖液及連接促進劑等成分,只需要往DNA混合液中加入等體積的2×T4 DNA Ligase Master Mix即可完成連接反應(yīng)。
              該產(chǎn)品在-20℃不會凍結(jié),無需長時間的化凍過程,使用非常簡便。DNA片段在連接酶的作用下短時間便可發(fā)生高效連接。本產(chǎn)品應(yīng)用于粘性末端、平滑末端雙鏈DNA連接及TA克隆等。
              保存條件:-20℃保存。
              注意事項:
              1.本試劑在-30℃以下溫度長時間保存時可能會產(chǎn)生凍結(jié),但經(jīng)試驗證實,溶解后不影響連接活性,反復(fù)凍融多次不影響其活性。
              2.T4 DNA ligase需要Mg2+為激活劑,因此螯合Mg2+的EDTA的存在會阻礙連接反應(yīng)。溶解于高濃度EDTA緩沖液的DNA需要用滅菌水或TE緩沖液進行置換。6.png


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              PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

              試劑:
              模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
              設(shè)備:
              PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果。

              PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗:

              PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

              一、變性:

              利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。

              二、退火或稱接合,復(fù)性:

              在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。

              三、延伸:

              DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

              PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

              1、變性溫度和時間:

              保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

              2、復(fù)性溫度和時間:

              PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

              3、延伸溫度和時間:

              一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。

              4、循環(huán)數(shù):

              其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴增增加。

              公司正在出售的產(chǎn)品:

              小腸結(jié)腸炎耶爾森菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              超敏生長激ELISA試劑盒 U S-GH免費代測試劑

              鴨腺病毒染料法熒光定量PCR試劑盒(暫停)

              狂犬病毒PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

              成纖維細胞生長因子17ELISA試劑盒 FGF17免費代測試劑

              產(chǎn)克雷伯菌PCR檢測試劑盒說明書

              豬圓環(huán)病毒PCR檢測試劑盒

              晶狀體蛋白μELISA試劑盒

              毛細線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              大豆內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒

              叢狀蛋白A4ELISA試劑盒

              毛樣枝孢霉染料法熒光定量PCR試劑盒

              馬勃探針法PCR鑒定試劑盒

              蛋白O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移1ELISA試劑盒

              卡氏枝孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒

              禽呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              蛋白酪氨磷樣蛋白AELISA試劑盒

              甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)核檢測試劑盒

              病毒N8亞型(AIV-N8)核檢測試劑盒

              電壓門控鉀通道抗體ELISA試劑盒

              佩蘭探針法PCR鑒定試劑盒

              馬傳染性貧血(EIAV)核檢測試劑盒

              動力蛋白激活蛋白6ELISA試劑盒

              六種腦炎腦膜炎病原體核檢測試劑盒(單純皰疹病毒 1 型、單純皰疹病毒 2 型、水痘帶狀皰疹病毒(人類皰疹病毒 3 )、腸病毒、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌)"

              麻風桿菌(ML)核檢測試劑盒

              多聚A特異性核糖核ELISA試劑盒

              捻轉(zhuǎn)毛細線蟲PCR檢測試劑盒直銷

              禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒

              二肽基肽7ELISA試劑盒

              貓源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

              蠟樣桿菌核檢測試劑盒

              人鈣激活中性蛋白6(CAPN6)ELISA檢測試劑盒

              諾卡菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              炮姜染料法PCR鑒定試劑盒

              人類似RIKENcDNA4933429F08基因試劑盒elisa

              瓜蔞探針法PCR鑒定試劑盒

              鮰愛德華氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              2XT4 DNA Ligase人蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP 9.5)ELISA試劑盒

              豬捷申病毒PCR檢測試劑盒

              異源曼氏桿菌PCR檢測試劑盒

              TU3A蛋白(TU3A)ELISA Kit

              傳染性膿皰皮炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              禽肺病毒(APV)核檢測試劑盒

              人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA試劑盒

              佩氏著色霉探針法熒光定量PCR試劑盒

               


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