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              產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

              酵母焦磷酸酶

              簡要描述:

              酵母焦磷酸酶公司正在出售的產(chǎn)品:抗鼠CD4單克隆細(xì)胞 磷化微管相關(guān)蛋白封閉多肽 糞腸球菌PCR檢測試劑盒 大鼠纖溶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒 土壤硝態(tài)氮活性比色法檢測試劑盒 依利諾斯類芽胞桿菌 鋅指蛋白350/乳腺癌易感基因1結(jié)合蛋白抗體

              更新時(shí)間:2024-01-14

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              酵母焦磷酸酶

              商品屬性:

              產(chǎn)品名稱

              規(guī)格

              貨號

              酵母焦磷酸酶

              20U

              A-PJ1159

              酵母焦磷酸酶

              100U

              A-PJ1159

              無機(jī)焦磷酸酶(酵母)純化自重組 E. coli 菌株,攜帶有從釀酒酵(Saccharomycescerevisiae)克隆的 ppa基因和蟾分枝桿菌(Mycobacterium xenopi)GyrA 內(nèi)含肽的融合基因。該焦磷酸酶催化無機(jī)焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽:–4+ H20 →2HP04–2。在核酸擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中,可解除生成的無機(jī)焦磷酸鹽對反應(yīng)體系的抑制。

              應(yīng)用
              反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中提高 RNA 產(chǎn)量
              增強(qiáng) DNA 復(fù)制
              儲存:-20°C 可保存 3 年。
              活性定義:

              1 單位指標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件下(20 mM Tris-HCl,pH7.5,2 mM MgCl2,2 mM PPi,25°C 反應(yīng) 10 分鐘)每分鐘催化無機(jī)焦磷酸鹽生成 1 μmol 磷酸鹽所需的酶量。
              使用注意事項(xiàng):
              (1) 該酶在多種反應(yīng) Buffer 中均具有活性,通常該酶在HDA 擴(kuò)增、LAMP 擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)中,可直接接入即可。
              (2) 該酶的用量在不同的實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化,通常在0.05~1 U/ml 濃度調(diào)整。
              (3) 該酶的最佳反應(yīng)溫度為 25°C,其在 16~37°C 均有活性,65°C 10min 可使該酶失活。

              QQ截圖20240110094643.jpg


              PCR實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題有哪些?

              沒有ct值

              檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

              1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準(zhǔn));

              2、PCR程序設(shè)置錯(cuò)誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時(shí)采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸時(shí)采集信號,另外熒光采集是否選中;

              3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

              4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準(zhǔn)備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復(fù)凍融;

              5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴(kuò)增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴(kuò)增)。

              ct值過晚

              在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準(zhǔn)確。

              因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和目的進(jìn)行。

              1、擴(kuò)增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進(jìn)行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計(jì)不合理, 需要重新設(shè)計(jì);

              2、PCR程序不合適, 改用三步法進(jìn)行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當(dāng)降低退火溫度; 退火/延伸時(shí)間短(可以在推薦的時(shí)間條件下延長10s);

              3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

              4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設(shè)計(jì)超過500bp;

              5、模板中存在抑制物。用高純度模板進(jìn)行PCR檢測或?qū)⒛0暹M(jìn)行稀釋。

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              PCR基本步驟及注意事項(xiàng)?

              一、實(shí)驗(yàn)原理

              PCR是體外人工選擇性擴(kuò)增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復(fù)制。在生物體內(nèi)DNA復(fù)制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計(jì)的特定序列,實(shí)現(xiàn)對特定位置的擴(kuò)增;PCR Buffer提供一個(gè)反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應(yīng)溫度實(shí)現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復(fù)重復(fù)此過程即可實(shí)現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴(kuò)增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進(jìn)一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

              在擴(kuò)增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴(kuò)增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應(yīng)。平臺期(Plateau)會使原先由于錯(cuò)配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴(kuò)增,達(dá)到較高水平。因此,應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達(dá)平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

              二、主要的成分

              1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時(shí)間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預(yù)變性時(shí)間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

              注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時(shí)只有一個(gè)引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個(gè)引物均與特異位點(diǎn)結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進(jìn)行PCR擴(kuò)增,原因就在于實(shí)現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

              2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進(jìn)行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴(kuò)增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

              公司正在出售的產(chǎn)品:

              胎兒滴蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

              T細(xì)胞受體ELISA試劑盒 TCR免費(fèi)代測試劑

              人腺病毒D59型探針法熒光定量PCR試劑盒

              流行性造血器官壞死病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)

              淀粉αELISA試劑盒 Amyα免費(fèi)代測試劑

              住白細(xì)胞原蟲屬通用PCR檢測試劑盒直銷

              促生長轉(zhuǎn)ScGH基因成分核檢測試劑盒

              DEAD框肽5ELISA試劑盒

              羅氏沼蝦諾達(dá)病毒PCR檢測試劑盒

              腦膜炎奈瑟菌CPCR檢測試劑盒

              動(dòng)力蛋白激活蛋白4ELISA試劑盒

              螺桿菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒

              綿羊布魯氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒

              耳蝶呤1ELISA試劑盒

              紅斑丹毒絲菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              牛支原體染料法熒光定量PCR試劑盒

              二肽基肽6ELISA試劑盒

              乙型肝炎病毒(HBV)核檢測試劑盒

              牛眼莫拉氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              泛激3ELISA試劑盒

              禽腺病毒(I群)探針法熒光定量PCR試劑盒

              綿羊布魯氏菌PCR檢測試劑盒

              防御β119ELISA試劑盒

              枯草桿菌PCR試劑盒

              蜜蜂微孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              肺炎衣原體ELISA試劑盒

              氣單胞菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              牛瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              輔激活因子激活因子ELISA試劑盒

              鹿源性成分(Deer)核檢測試劑盒

              輪狀病毒群PCR檢測試劑盒供應(yīng)

              人布盧姆綜合征蛋白(BLM)試劑盒ELISA

              通用型H-H亞型PCR試劑盒

              腦膜炎敗血金黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              人雄激結(jié)合蛋白(ABP)ELISA試劑盒

              單孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              馬傳染性貧血病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              κB抑制蛋白激(IKK)檢測試劑盒elisa

              火雞沙門氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              衣阿華支原體探針法熒光定量PCR試劑盒

              人白介12(IL-12/P70)ELISA試劑盒

              酵母焦磷酸酶腦膜炎黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              豬瘟病毒/豬藍(lán)耳病病毒通用型(CSFV/PRRSV-U)核檢測試劑盒

              人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu))NIMA結(jié)合1(PIN1)試劑盒ELISA

              禽腺病毒C4(FADV-C-4)核檢測試劑盒

               


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