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              產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST

              Benzonase 核酸酶

              簡要描述:

              Benzonase 核酸酶公司正在出售的產(chǎn)品:小鼠14天胚胎成纖維細胞 補體C3d片段封閉多肽 短古柏線蟲PCR檢測試劑盒 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISA試劑盒 水溶性氯化物活性比色法檢測試劑盒 成團泛菌 E3連接MMS21蛋白抗體

              更新時間:2024-01-12

              分享到: 1
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              Benzonase 核酸酶

              商品屬性:

              產(chǎn)品名稱

              規(guī)格

              貨號

              Benzonase 核酸酶

              25KU

              A-PJ1103

              Benzonase 核酸酶

              10000ku

              A-PJ1103

              是來自經(jīng)基因工程改進的核酸內(nèi)切酶。它能降解所有形式(包括單鏈,雙鏈,線性和環(huán)狀)的 DNA 和 RNA 而沒有蛋白裂解活性,在廣泛條件范圍具有很高的特異性。它將核酸消化成3-5 堿基長度(雜交限度以下)的 5’-單磷酸寡核苷酸,從重級蛋白中去除核酸的操作,符合 FDA 關于核酸污染的處理規(guī)程。Benzonase 核酸酶迅速水解核酸的能力使該酶成為降低粘度以減少處理時間和增加蛋白產(chǎn)量的選擇。該酶與BacReady-Protein Extraction Solution和RIPA LysisBuffer 等蛋白抽提試劑配合使用,從而消除粗提物中的核酸,降低粘度。

              單位定義:在 30 分鐘內(nèi)使△A260 值降低 1.0(相當于消化 37 μg DNA )的酶量定義為一個活性單位。
              QQ截圖20240110094643.jpg應用
              蛋白提取時去除核酸污染
              2D 凝膠電泳
              Western Blot
              IP- Western
              儲存:置于-20°C 保存。
              操作方法
              1. 組織處理方法:將 30-50mg 動植物組織研磨充分后,加入 100-200 μl RIPA 裂解液,同時加入 1 μlBenzonase 核酸酶,旋渦振蕩混合均勻,室溫孵育 30min。
              2.細胞處理方法:將 106-107懸浮細胞液 6,000 rpm 離心10min 后,棄掉上清液,使用 100 μl RIPA 裂解液重懸細胞,同時加入 1μl Benzonase 核酸酶,旋渦振蕩混合均勻,室溫孵育 30min。注意:貼壁細胞重懸于 PBS 后,處理方法同懸浮細胞。
              3. 大腸桿菌細胞處理:將 500 μl E.coli 培養(yǎng)液 8,000rpm 離心 5min 后,棄掉上清液,使用 100 μl 大腸桿菌裂解液重懸細胞,同時加入 1μl Benzonase 核酸酶,旋渦振蕩混合均勻,室溫孵育 30min。
              4. 裂解步驟完成后,將裂解產(chǎn)物于 13,000 rpm 離心 10min后,取上清即為提取蛋白(包涵體蛋白留取沉淀為提取蛋白)。
              5. 提取完蛋白后可利用 BCA 蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。



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              PCR基本步驟及注意事項?

              一、實驗原理

              PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復制。在生物體內(nèi)DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列,實現(xiàn)對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應的緩沖環(huán)境;反應過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應溫度實現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

              在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應, 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

              二、主要的成分

              1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產(chǎn)物預變性2min即可。

              注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結(jié)合,從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現(xiàn)PCR反應的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

              2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

              PCR實驗中應該注意的問題有哪些?

              沒有ct值

              檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

              1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

              2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

              3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

              4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

              5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

              ct值過晚

              在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

              因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設計和目的進行。

              1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;

              2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

              3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;

              4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設計超過500bp;

              5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或?qū)⒛0暹M行稀釋。

              公司正在出售的產(chǎn)品:

              馬爾太蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒

              κB抑制蛋白激ELISA試劑盒 IKK免費代測試劑

              豬偽狂犬病毒(gB基因)探針法熒光定量PCR試劑盒

              巨細胞病毒PCR檢測試劑盒供應

              蛋白激D2ELISA試劑盒 PKD2免費代測試劑

              蜜蜂微孢子蟲通用PCR檢測試劑盒直銷

              肉毒桿菌F型(CB-F)核檢測試劑盒

              半胱氨甘氨豐富蛋白1ELISA試劑盒

              馬克洛菌PCR檢測試劑盒

              柯薩奇病毒A24PCR檢測試劑盒

              蛋白磷1調(diào)節(jié)因子亞基1BELISA試劑盒

              馬可尼小囊蟲染料法熒光定量PCR試劑盒

              貓免疫缺陷病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

              毒蕈堿型乙酰受體亞型M3ELISA試劑盒

              腸侵襲性大腸桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              蘋果銹果類病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              多聚A特異性核糖核ELISA試劑盒

              中華鱉虹彩病毒(STIV)核檢測試劑盒

              葡萄球菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒

              耳石蛋白1ELISA試劑盒

              禽傳染性支氣管炎病毒Delaware型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              貓免疫缺陷病毒PCR檢測試劑盒

              二羰基/L-糖還原ELISA試劑盒

              類鼻疽伯克霍爾德菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              貓杯狀病毒(FCVPCR檢測試劑盒(熒光-PCR法)

              芳基硫酯DELISA試劑盒

              諾如病毒G2型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

              彭氏變形菌PCR檢測試劑盒

              肺炎衣原體抗體ELISA試劑盒

              馬媾疫錐蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

              流感病毒N3亞型PCR檢測試劑盒(熒光PCR法)

              人蛋白(肽酰脯氨酰順/反異構(gòu))NIMA結(jié)合1(PIN1)試劑盒ELISA

              禽傳染性支氣管炎病毒793PCR檢測試劑盒供應

              牛分支桿菌卡介苗PCR檢測試劑盒供應

              人阿黑皮原(POMC)elisa試劑盒

              瓜納瑞托病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              腸道病毒C組染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

              人胞外超氧化物歧化(SOD3)ELISA檢測試劑盒

              科恩酒曲菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              堪薩斯分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

              β葡糖苷(β-glucosidase) ELISA Kit

              Benzonase 核酸酶比氏腸微孢蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

              布尼亞病毒(BV)核檢測試劑盒

              人促胃液受體(GsaR)ELISA Kit

              /新城疫病毒(AIV/NDV)核檢測試劑盒

               


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